Trabalhando com cromatografia líqüida de alta performance, um grupo de investigadores da Escola de Medicina da Universidade de Yale fez duas interessantes observações enquanto determinava as frações de bilirrubina em amostras seqüenciais obtidas de pacientes com uma variedade de distúrbios resultantes em hiperbilirrubinemia.

Eles relataram que a bilirrubina ligada à albumina aparece no soro quando a excreção hepática da bilirrubina conjugada encontra-se defeituosa; e que a bilirrubina delta torna-se um componente mais volumoso da bilirrubina do soro conforme a icterícia vai cedendo levando a bilirrubina a persistir no plasma mesmo depois do seu desaparecimento na urina.

BILIRRUBINA DELTA NO PROGNÓSTICO DE PACIENTES COM DOENÇAS DE FÍGADO

A bilirrubina total (TIL) no soro é composta Por duas frações diazo-reativas : uma fração indireta ou não conjugada (Bu),apolar, e uma fração direta (DBIL),geralmente atribuída a conjugados da Bu solúveis em água. A Bu reage ao reagente diazo apenas depois de ser desabsorvida da albumina do soro com detergentes ou cafeina. De modo contrário, presumiu-se que as bilirrubinas solúveis em água fossem bilirrubinas conjugadas de açúcar ,as quais se unem livremente à albumina e são diretamente diazo-reativas sem a presença de aditivos.

Em 1980 ,um método de película fina em múltiplas camadas (chamado de slide Ektachem)foi desenvolvido para a quantificação da TBIL, definido na época como o total de bilirrubina não conjugada e bilirrubina conjugada. Ao ser aplicado a mais de 10.000 soros neo-natais, o slide fez a previsão correta da TBIL, relativo aos métodos diazo. Contudo,em aproximadamente 50% dos soros ictéricos adultos aleatoriamente selecionados o slide subestimou a TBIL relativo ao teste diazo com tendências variando entre 30 e 80%.

Este mistério foi decifrado com o desenvolvimento de um método cromatográfico líquido de alta performance (LC)que separa a bilirrubina do soro em múltiplas frações. Este método foi usado para estabelecer, pela primeira vez, a existência de uma nova fração de bilirrubina no soro chamada de bilirrubina delta, para se somar à Bu e Bc. Foi descoberto que a bilirrubina delta era um tetra pirrol de reação direta irreversivelmente ligada a albumina. Principalmente devido ao seu tamanho, a bilirrubina delta ficou retida nas camadas superiores do slide, e portanto não foi detectada na camada de determinação de bilirrubina. Insignificante no soro não ictérico, a bilirrubina delta aumenta rapidamente juntamente com a Bc em distúrbios hepato biliares, especialmente em icterícia obstrusiva. A bilirrubina delta permanece em níveis baixos em pacientes cuja capacidade de conjugação é deficiente e em doenças hemolíticas.

A importância clínica da bilirrubina delta,através de dados de 10.000 amostras de pacientes examinadas em três Continentes, relaciona-se a sua significância prognósticas em doenças do fígado

UTILIDADE DIAGNÓSTICA CLÍNICA DA BILIRRUBINA DELTA

A capacidade de resolução da bilirrubina total em bilirrubina não conjugada, conjugada e delta e a quantificação das mesmas através de cromatografia líquida de alta pressão, foi avaliada em hiperbilirrubinemia de diversas causas. Descobrimos que quantidades pequenas de bilirrubina delta em adultos com hiperbilirrubinemia não conjugada,causada por distúrbios hemolíticos,não estão correlacionados por gravidade de doença. De modo contrário,em casos envolvendo câncer,colelitíase, ou obstrução intestinal,e uma biossíntese defeituosa da bilirrubina causada por cirrose,a Bc e bilirrubina delta têm perfis cinéticos diferentes e,consequentemente, valores diagnósticos distintos. Durante a resolução desses distúrbios hepato biliares, a Bc depura-se rapidamente do soro, enquanto a bilirrubina delta mantém a fração de origem por 20 dias. A falha na acumulação da bilirrubina delta levou a um prognóstico de recuperação insatisfatório. Nestes casos, os níveis de enzima do fígado apresentaram resultados conflitantes. O perfilamento em série da Bc e bilirrubina delta diferiram entre casos de detoxificação aguda de álcool e hepatite alcoólica aguda verso crônica. O uso de tais perfis pode ajudar na identificação de pacientes com risco de desenvolvimento de cirrose.

A bilirrubina delta foi recentemente reidentificada como uma fração de bilirrubina total no soro que é composta de albumina covalentemente ligada a bilirrubina não enzimarticamente derivada da albumina e bilirrubina monoconjugada.. A bilirrubina delta foi relatada como ausente ou presente em pequenas quantidades em voluntários sadios, neonatos com icterícia psicológica e pacientes com hemólise. O mecanismo exato de sua formação é desconhecido, porém foi relatado como sendo necessário um processo ativo de conjugação de bilirrubina pelo fígado ou a presença de colestasia.

Supõe-se que a formação de bilirrubina delta dependa da presença de um mecanismo de conjugação de bilirrubina intacta eou dano da secreção da bilirrubina conjugada. A presença de bilirrubina delta em pacientes cujo nível de TB é normal e naqueles em que a bilirrubina conjugada não é detectada sugere que a formação de bilirrubina delta possa originar-se de um caminho conjugado distinto daquele do sistema convencional de conjugação de diglicuronídeo e monodiglicuronídeo, não sendo dependente de dano na secreção da bilirrubina conjugada.

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