Albumina

INTRODUÇÃO
O teor de proteínas plasmáticas no plasma é de aproximadamente 7 a 7,5g/dL. As proteínas plasmáticas, assim, compreendem a maior parte dos sólidos do plasma. Essas proteínas, na realidade, são uma mistura complexa incluindo não só as proteínas simples mas, também, proteínas mistas ou conjugadas como as glicoproteínas e vários tipos de lipoproteínas .As proteínas séricas compreendem principalmente as frações albumina e globulina do plasma .A fração albumina das proteínas do soro é a mais abundante das proteínas séricas, sendo sintetizada no fígado. Tem um peso molecular de aproximadamente 69.000. A estrutura primária da albumina consiste em 610 aminoácidos ordenados em uma cadeia peptídica simples. A estrutura secundária da albumina parece apresentar as cadeias dobradas sobre si, para formar camadas que podem ser desenroladas por redução do pH e novamente reenroladas por elevação do pH.No homem a albumina é a principal proteína do soro, que normalmente constitui 60% das proteínas totais.

SÍNTESE
Sintetizada quase toda pelo fígado, a albumina tem uma meia-vida de 15 a 19 dias. A síntese desta proteína está claramente ligada ao fornecimento de aminoácidos estruturais ao fígado e daí a sua sensibilidade à desnutrição proteica. A síntese da albumina começa dentro de 30 minutos, quando os indivíduos em depleção proteica recebem quantidades suficientes de aminoácidos, o que sugere que a síntese da albumina pode não ser constante, mas ocorrer em relação com os suprimentos alimentares e com a absorção de subunidades proteicas.

DISTRIBUIÇÃO
Num indivíduo de tamanho médio, 350 gramas de albumina fazem parte da massa corporal, estando 140 gramas no espaço intravascular e 210 gramas no espaço extravascular. A albumina distribui-se por toda a extensão do corpo, incluindo ossos e pele, encontrando-se apenas cerca de 2 gramas dentro do fígado, sendo que a maior parte está dentro dos canais linfáticos.

FUNÇÕES
A principal função da albumina normal é o transporte e armazenagem de uma ampla variedade de substâncias de baixo peso molecular, como o cortisol, hormônios sexuais, cálcio e drogas várias. A qualificação “normal” deve ser atribuída, porque se sabe que algumas variantes de albumina podem ser alteradas na sua capacidade de fixarem drogas como a warfarina.

A fixação, e consequentemente a destoxificação, constitui outra das funções primaciais da albumina no recém-nascido.

A bilirrubina fixada à albumina tem menor probabilidade de passar para os tecidos hidrófobos do cérebro do que a bilirrubina livre.

Certos metais pesados são também fixados à albumina numa forma não tóxica. Em casos de hemólise extensa, forma-se um complexo contendo heme chamado metahemalbumina.

Desempenha também um papel muito importante no metabolismo das gorduras, além de constituir uma fonte de nitrogênio.

A ação das lipoproteínas-lipases sobre os lipídios libera ácidos graxos instáveis, que são ligados à albumina durante um curto período, num trânsito rápido do fígado para os tecidos periféricos. Além da sua função como molécula fixadora e de transporte, a albumina desempenha um papel importante na nutrição.

Argumenta-se que a proteína está constituída de tal modo que é facilmente metabolizada, contendo todos os aminoácidos essenciais. Na desnutrição, os níveis plasmáticos da albumina diminuem muito mais que os níveis de gamaglobulinas. Em casos de má nutrição, especialmente em Kwashiorkor (dietas deficientes em proteinas e calorias) se observam níveis muito baixos.

Outra das funções importantes da albumina é a manutençào da pressão osmótica. É responsável por 75% da pressão coloidosmótica do plasma. Cada grama de albumina sérica exerce uma pressão osmótica de 5,54 mm de Hg, enquanto que a mesma quantidade de globulina sérica exerce uma pressão de apenas 1,43 mm de Hg. Isto se deve ao fato das frações de albumina consistirem em proteínas de peso molecular muito mais baixo que os das frações de gamaglobulina.

Um grama de albumina reterá 18 ml de líquido na corrente sangüinea. Quando os níveis de albumina diminuem basta uns 20 g/L, com freqüência se observa edema devido a redução da pressão coloidosmótica. As alterações dos níveis séricos de albumina podem ser resultantes de um grande número de sequelas patológicas e em conseqüências não conhecidas

EXCREÇÃO
O catabolismo desta proteína passa-se principalmente em órgãos com elevadas taxas de metabolismo, por exemplo, fígado, baço, rim, músculos, etc. As células incorporam gotículas de plasma por pinocitose e digerem o conteúdo proteico até aminoáciodos, que voltam a estar disponíveis para sínteses proteicas.
MÉTODOS

Por ser uma proteína estável com problemas mínimos de heterogenidade, a albumina é facilmente estudada por vários métodos químicos e imunológicos. A capacidade que a albumina tem para fixar e transportar pequenas moléculas é explorada nas provas de fixação de corantes, atualmente de ampla utilização. Dado que os pacientes podem ter a albumina já parcialmente saturada por medicamentos correntes como a aspirina ou por metabólitos como a bilirrubina, os métodos de fixação de corantes podem fornecer valores falsamente baixos. Os métodos imunoquímicos para estudo da albumina parecem não ser afetados pelas frações moleculares transportadas e estão recebendo crescente atenção no laboratório clínico. Praticamente todos os métodos imunoquímicos, para análise de proteínas solúveis, têm sido aplicados à análise da albumina.

1 – Método de Precipitação

As primeiras técnicas para a análise de albumina se basearam na precipitação ácida ou com salina ou com solventes.

- Tipo de Análises: Quantitativo.

- Princípio: As alterações na carga negativa da proteína causam a sua precipitação .

- Amostra: Soro .

Como não podem ser automatizadas facilmente, os métodos de precipitação

tem somente interesse histórico.

2 – Método do Triptofano

A medição da albumina pode ser realizada mediante a determinação direta de globulina baseada no conteúdo de triptofano, calculando albumina por subtração da globulina a partir das proteínas totais. O conteúdo de triptofano da albumina sérica é de 7 a 10% do presente na globulina, em base ponderada.

- Tipo de Análise: Quantitativo .

- Princípio: ácido glixílico + triptofano presente na globulina .

Proteína Total – Globulina = Albumina .

- Amostra: Soro .

- Comentários: Se relaciona bem com a eletroforese, porém requer a medição da proteína total.

Os métodos por determinação de triptofano nunca foram muito usados devido a simplicidade e especificidade dos métodos para albumina por fixação de corantes.

3 – Método por Eletroforese

A albumina sérica pode ser determinada quantitativamente por técnicas eletroforéticas. A eletroforese é a migração de partículas carregadas eletricamente, em uma solução eletrolítica, pela passagem de uma corrente elétrica através de uma solução. Vários componentes proteicos de uma mistura, como o plasma, em pH acima e abaixo de seus pontos isoelétricos, migrarão em velocidades variáveis em tal solução, porque possuem diferentes cargas na superfície da partícula. As proteínas, assim, tenderão a separar-se em camadas distintas. A amostra a analisar é dissolvida em um tampão adequado (para o plasma, usualmente, é o dietilbarbiturato de sódio 0,1 N, em pH 8,6). A mistura, em seguida, é colocada na célula de vidro, em forma de U, do aparelho de eletroforese de Tiselius, e os eletrodos positivo e negativo são ligados as extremidades da célula. Quando a corrente é aplicada, inicia-se a migração dos componentes da proteína. As moléculas de albumina, que são menores e de cargas mais elevadas, apresentam a velocidade de migração mais rápida, seguidas por várias globulinas. Depois de algum tempo, podem ser notados os limites entre as frações separadas em virtude das diferenças no índice de refração, causadas pelas variações das concentrações de proteína. O registro fotográfico dessas variações constitui o que se denomina de padrão eletroforético.

No plasma humano normal, 6 faixas distintas foram identificadas. Elas são designadas, na ordem de sua mobilidade decrescente, como albumina, alfa 1 e alfa 2 globulinas, betaglobulinas, fibrinogênio e gama globulina.

A distribuição dos componentes eletroforéticos do soro humano normal é a seguinte :

c) Comparação com imunodifusão radial:

A comparação dos resultados entre o método automatizado e a imunodifusão radial está demonstrada na figura 5.

d) Precisão:

O valor médio do soro controle foi de 46,7 g/L, foram realizadas 20 análises com um desvio padrão de 0,3 g/L. Em análises realizadas em dias alternados o desvio padrão foi de 1,0 g/L. Em análises de soros de 162 pacientes realizadas em duplicatas (em diversos dias) observou-se um desvio padrão de 0,74 g/L entre as duplicatas.

Multichannel Analysis Sistem:

a) Linearidade: A curva padrão é linear até 60 g/L e passa através da origem.

b) Comparação com o método manual: Os resultados obtidos do Multichannel Analysis Sistem e do método manual estão demonstrados na Figura 6. Os resultados foram obtidos a partir de seis corridas diferentes, realizadas em um período de três meses.

c) Precisão: O soro controle foi analizado em 21 dias diferentes, sendo feitas 50 a 100 análises por dia, com um padrão diário. Houve um desvio de 0,21 a 0,58 g/L, sendo de geralmente 0,3 g/L.

6) Discussão:

A reação entre o verde de bromocresol e a albumina, ocorre quase que imediatamente. Entretanto não há nenhum equipamento comercial que possa medir a absorbância imediatamente após a adição do reativo de cor. Torna-se, assim, necessário investigar outras soluções para o problema. Uma delas consiste em extrapolar os resultados obtidos até o tempo de adição do reativo de cor, outra consiste em minimizar o tempo, até que não haja erros significativos. Utilizando o segundo método, foi encontrado que resultados aceitáveis são obtidos quando a reação é realizada entre 8-10 segundos.

Outro importante fator, é o diluente utilizado na pré diluição. Diferentes diluentes tem sido utilizados. Água destilada demonstrou ser o melhor porque o uso de outors diluentes co cloreto de sódio 9g/L ou tampão succinato usado no reagente forneceram resultados falsamente aumentados. Há provavelmente um rearranjo conformacional de uma ou mais proteínas que reagem mais lentamente com BCG, nas amostras diluídas. O rearranjo protéico então reage imediatamente com o reagente de BCG como se fosse a albumina. Entretanto, é possível que altas concentrações de imunoglobulinas em alguns soros causem precipitação quando diluídas com água. Este erro não é levado em conta devido à grande diluição do soro utilizada na mistura final de reação.

Há pequenos acréscimos de leituras de reação com aumentos da temperatura. Assim seria de se esperar que os piores resultados obtidos, quando comparados com o método imunológico, fossem os realizados a 37 o C mas foram obtidos bons resultados, mesmo sob estas condições. É importante manter o sistema termostatizado porque a absorbância do reagente de BCG (branco) é sensível a mudanças de temperatura. Altas temperaturas provocam aumentos das absorbâncias. Isto não é o caso do complexo albumina – BCG.

Com o outro sistema utilizado, curvas padrões lineares passando através da origem foram obtidas. Isto facilita o uso de somente um padrão, por exemplo, 40 g/L, nos métodos de rotina. Este padrão é corrido diversas vezes em um lote de amostras a fim de nos fornecer resultados dignos de confiança para o cálculo dos soros dos pacientes. Foram comparados os resultados de métodos imunológicos e o método do BCG utilizando o Reaction Rate Analyser, bem como o método manual de BCG e o método utilizando o Multichannel analysis System. Os resultados finais podem ser melhorados, diminuindo-se os tempos de reações.

É demonstrado que a reação imediata da albumina com o BCG pode ser realizada por diferentes sistemas automatizados de análise tendo uma boa comparação com os métodos imunológicos. Assim, é possível realizar determinações da albumina automaticamente, utilizando pouco reagente e a um baixo custo para o laboratório de maneira rápida e simples.

INTERPRETAÇÃO

A síntese da albumina ocorre muito cedo no desenvolvimento fetal. Pela quarta à sexta semana de gestação, o saco vitelino e as células hepáticas produzem proteínas que são imunologicamente identificáveis como a albumina. Os valores dos adultos são atingidos pela vigésima e vigésima-sexta semanas de gestação e por conseguinte o soro do sangue do cordão têm um conteúdo completo desta proteína. Os valores de albumina sérica mantêm-se notavelmente estáveis no indivíduo normal até uma idade avançada, começamdo então uma tendência para uma descida significativa. As mulheres têm geralmente valores menores que os homens da mesma idade.

Os valores da albumina diminuem durante a gravidez, à medida que esta avança e algumas mulheres sofrem variações dos valores da albumina plasmática durante o ciclo menstrual. A modificação com contraceptivos não afeta de maneira significativa os valores da albumina.

A hipoalbuminemia é uma marca distintiva de desnutrição proteica, quer esta seja devida a “Kwashiorkor”, alcoolismo, parasitoses, doenças malignas ou à síndrome de “chá e torradas” das pessoas idosas que vivem sozinhas. Os baixos níveis séricos de albumina estão mais frequentemente associados com inflamações crônicas e doenças graves agudas. Contudo, se o processo difere ou não do anterior, i.e. ,suprimento insuficiente de aminoácidos, continua sendo matéria de discussão. Vários medicamentos citotóxicos têm um efeito depressor sobre a síntese das proteínas plasmáticas, incluindo a albumina. Nas crianças, a hipoalbuminemia e o edema periférico estão estreitamente associados; no adulto, o edema é menos previsível.

Valores muito baixos de albumina fazem prever doenças graves seja por aumento das perdas e/ou aumento do catabolismo, seja por diminuição da síntese. Estados patológicos como a cirrose alcoólica, acompanhados de hipoalbuminemia, resultam muitas vezes de desnutrição proteica e de uma diminuição do tecido hepático funcionante. Nos pacientes, cuja doença se acompanha de hipertensão portal, a mal absorção aumenta o problema. Desde que lhe sejam fornecidos os materiais para a síntese em quantidades adequadas, o fígado é capaz de manter níveis suficientes de albumina sérica, mesmo havendo perdas moderadamente grandes pelo rim; contudo, os pacientes nefróticos, mesmo bem alimentados podem ter baixos níveis séricos de albumina quando persiste a inflamação ativa.

Níveis significativamente diminuídos de albumina, em indivíduos sem deficiências congênitas de albumina, acompanham e são acompanhados por muitas doenças da homeostase.

A hiperalbuminemia usualemente é atribuída a uma desidratação ou hemoconcentração.

Nos últimos anos tem se aplicado o termo microalbuminemia para a excreção urinária aumentada de albumina. Esta condição esta relacionada com problemas diabéticos que logo manifestam uma enfermidade renal. O limite superior de excreção de albumina nos adultos normais é de 12 a 15 mg/min. A definição operacional de microalbuminemia é de 15 a 30 mg/min a 150 mg/min. O esforço físico, hipertensão, infecção do trato urinário e enfermidade cardíaca também podem aumentar a excreção urinária de albumina. A importância da determinação de microalbuminúria, surge da observação de que os diabéticos com uma excreção urinária menor que 15 mg/min tem menos probabilidade de desnevolver uma nefropatia com possível insuficiência renal na década seguinte, porém aqueles com níveis de excreção superior tem esta probabilidade aumentada.

A analbuminemia congênita é uma síndrome muito rara, em que os pacientes são capazes de sintetizar apenas quantidades muito pequenas de albumina (inferior a 0,5% do normal), só mensuráveis por métodos muito sensíveis. O interesse clínico destes pacientes localiza-se no fato deles apresentarem poucos problemas atribuídos a deficiência de albumina, apesar do papel fundamental que a albumina tem na manutenção da pressão osmótica e no transporte e armazenagem de substâncias com baixo peso molecular. O valor das proteínas totais nesta indivíduos varia entre 45 a 57 g/L, sendo a pressão coloidosmótica do plasma aproximadamente metade da esperada; não obstante, o edema periférico, quando existente, é moderado. A invulgar e inesperada benignidade da deficiência de um tão importante componente sangüineo, indica que a albumina pode na verdade não ser tão importante como geralmente se pensa.

Interferentes

a – Não utilizar amostras muito hemolisadas. Aparentemente, 1 mg% de hemoglobina ocasiona aumento de 1 mg% de albumina.

b – Há aumento pela interferência da amplicilina, nas desidratações, nas lipemias, no exercício muscular, no uso inadequado de torniquete na coleta.

c – Há diminuição da albumina nas hepatopatias, “stress”, traumas, má nutrição e síndrome nefrótica.

Notas

a – O soro é estável por três dias, em refrigerador e uma semana, em congelador.

b – A reação do verde de bromocresol depende da natureza da albumina utilizada; a albumina bovina difere da albumina humana cristalizada. Convém, portanto, padronizar a solução de albumina bovina com soros, de valores conhecidos.

c – Soros moderadamente lipêmicos não interferem na reação .

d – Os anticoagulantes a serem utilizados, no caso de plasmas, são a heparina e o EDTA.

e – É recomendável a utilização de pipeta de hemoglobina ou automática para a adição da amostra e do padrão. Limpar o lado externo da pipeta e lavar três vezes com o próprio reativo.

f – A recuperação do método é de 99% e a precisão é de 5%.

g – A vidraria deve estar perfeitamente limpa , pois os ácidos e álcalis interferem nos resultados .

h – Com a diminuição da albumina temos aparecimento de edemas, pois as proteínas têm papel importante na distribuição dos líquidos orgânicos. Quando os níveis são inferiores a 2 g/dL quase sempre há aparecimento de edemas.

i – Tendo-se os valores de proteínas totais e de albumina, o valor das globulinas pode ser:

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